養細胞的小伙伴們都知道,細胞一定要傳代,因為細胞在培養過(guò)程中不斷的繁殖,數量也隨之增加,然而培養皿/培養瓶的空間有限,增殖受到抑制,所以必須將一部分細胞移至別的培養皿/培養瓶,讓細胞有足夠生長(cháng)空間。
細胞傳代也不僅僅是為細胞安一個(gè)更大的“家",更重要的,是使細胞系或細胞株進(jìn)一步增殖,這樣,我們才能有足夠的細胞做各種各樣的實(shí)驗。
但是,對于傳代的時(shí)間,很多小伙伴都掌握不好,因為對于不同的細胞來(lái)說(shuō),判斷能否開(kāi)始傳代的標準略有不同,今天,我們就主要來(lái)聊一下,細胞傳代的時(shí)間問(wèn)題。
什么時(shí)候進(jìn)行細胞傳代?
對于貼壁培養和懸浮培養而言,判斷是否需要傳代主要看以下2個(gè)方面:
•細胞密度:
貼壁培養細胞進(jìn)入對數生長(cháng)期、未達到匯合狀態(tài)時(shí)即應進(jìn)行傳代,正常細胞達到匯合狀態(tài)時(shí)會(huì )停止生長(cháng)(接觸抑制),重新接種后需要較長(cháng)時(shí)間才能恢復,轉化細胞即使達到匯合狀態(tài)也能繼續增殖,但是在經(jīng)過(guò)大約兩個(gè)倍增時(shí)間后通常會(huì )變質(zhì)。類(lèi)似地,
懸浮培養的細胞進(jìn)入對數生長(cháng)期、未達到匯合狀態(tài)時(shí)也應進(jìn)行傳代。達到匯合狀態(tài)時(shí),懸浮培養的細胞會(huì )聚集成團塊,轉動(dòng)培養瓶時(shí)培養基會(huì )變得渾濁。
•培養基耗竭:
生長(cháng)培養基pH值降低通常表示乳酸蓄積,乳酸是細胞代謝的副產(chǎn)物。乳酸有細胞毒性,而且pH值降低也是細胞生長(cháng)的不利因素。pH值改變的速度通常取決于培養體系中的細胞濃度,細胞濃度越高,培養基耗竭的速度越快。
如果發(fā)現pH值迅速降低(>0.1–0.2pH單位),同時(shí)細胞濃度增大,則應對細胞進(jìn)行傳代。
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