方法一：使用程序凍存盒  
使用程序降溫盒是**-常用的凍存方法。市面上的降溫盒有些需要添加異丙醇，有些則不需要。  
降溫盒須恢復室溫后再使用。  
根據普諾賽實(shí)驗室細胞培養經(jīng)驗，使用程序凍存盒凍存效果良好，沒(méi)有凍存盒的同學(xué)可以參照下文方法二和方法三。  
操作步驟  
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預冷  
步驟2：離心收集對數生長(cháng)期的細胞（貼壁細胞消化下來(lái)離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時(shí)間3min）  
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記  
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）  
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉移至液氮長(cháng)期保存  
使用凍存盒操作示意圖  
▲使用凍存盒操作示意圖  
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液  
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。  
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應用。  
操作步驟  
步驟1：從冰箱拿出無(wú)血清非程序凍存液，待用  
步驟2：離心收集對數生長(cháng)期的細胞（貼壁細胞消化下來(lái)離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時(shí)間3min）  
步驟3：棄上清，加入適量無(wú)血清非程序凍存液，重懸細胞  
步驟4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記  
步驟5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉移至液氮長(cháng)期保存  
使用無(wú)血清非程序凍存液操作示意圖  
▲使用無(wú)血清非程序凍存液操作示意圖  
方法三：手動(dòng)梯度降溫  
在沒(méi)有凍存盒或者非程序凍存液時(shí)，可以選擇手動(dòng)梯度降溫。但手動(dòng)梯度降溫不適用于所有細胞，且效果不穩定，同樣需要**做凍存測試。  


http://www.whprocell.com/Products-35908602.html 
https://www.chem17.com/st481892/product_35908602.html